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產品名稱:大鼠細胞色素P4502E1
英文名稱:Rat cytochrome P450 2E1,CYP2E1 ELISA KIT
產品規格:96人份/48人份
各種種屬:人、大小鼠、豚鼠、兔子、豬、犬、牛、羊…
標本齊全:血清、血漿、細胞培養上清液、組織勻漿、組織液、關節液、胸腔溢液等…
經營品牌:美國RD分裝,原裝、美國RB原裝
保存條件:2-8℃
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上海勁馬生物公司銷售各種ELISA試劑盒,有RD,RB原裝,標本齊全,提供代測。如有疑問,可與上海勁馬銷售或技術 負責人:王
大鼠細胞色素P4502E1 ELISA技術操作要點,結合物
酶標記的抗原或抗體稱為結合物(conjugate)。抗原由于化學結構不同,可用不同的方法與酶結合。如為蛋白質抗原,基本上可參考抗體酶標記的方法。制備抗體酶結合物的方法通常有以下幾種。
1.戊二醛交聯法戊二醛是一種雙功能團試劑,可以使酶與蛋白質或其他抗原的氨基通過它而偶聯。戊二醛交聯可用一步法(如連接AP),也可用二步法(如連接HRP)。舉例如下:
2~5mg純抗體與5mgAP混合于0.1mol/LpH6.8的磷酸緩沖液1ml中,4℃下對同上緩沖液透析平衡。磁力攪拌下,緩慢加入1%戊二醛0.05ml,在室溫下放置2小時。在4℃下對0.05mol/LpH8.0Tris緩沖液透析平衡,即得酶標抗體。
辣根過氧化物酶可溶解于50%飽和度硫酸銨中。用上法交聯后可用50%飽和度硫酸銨沉淀酶標抗體,棄去上清中游離酶。
戊二醛一步法操作簡便、有效,而且重復性好。缺點是交聯時分子間的比例不嚴格,大小也不一,影響效果。
制備HRP抗體結合物也可用二步法,即先將HRP與戊二醛作用,透析除去戊二醛,在pH9.5緩沖液中再與抗體作用而形成酶標抗體。此法的效率可高于一步法10倍左右。
2.過碘酸鹽氧化法本法只用于HRP的交聯。該酶含18%碳水化合物,過碘酸鹽將其分子表面的多糖氧化為醛基。用硼氫化鈉(NaBH4)中和多余的過碘酸。酶上的醛根很活潑,可與蛋白質結合,形成按摩爾比例結合的酶標結合物。有人認為此法為辣根過氧化物酶交聯zui有效的方法。但也有只認為由于所用試劑較為劇烈,各批實驗結果不易重復。
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