ELISA試劑盒靈敏度低?

近日，有客戶在做完實驗后，反映陽性對照、質(zhì)控在內(nèi)的所有板孔顏色均較淡。這是什么原因造成的？我司技術(shù)整理后給出如下解析，邀您來看看！

 
容易造成的原因有：
1.試劑盒必須在有效期內(nèi)使用， 超過有效期的產(chǎn)品可能會產(chǎn)生很弱的信號；
2.試劑盒沒有按規(guī)定進行保存，受高溫影響；
3.試劑、樣品用前未平衡至室溫；
4.加入試劑的體積和時間有誤，移液器計量不準，吸嘴內(nèi)水分太多或不清潔；
5.洗板及加樣過程中，酶標受污染失活而失去催化顯色劑顯色的能力；
6.孵育時間及孵育溫度未達到要求 ，反應板放入培養(yǎng)箱時注意溫度并及時調(diào)整；
7.洗板次數(shù)過多，或濃縮洗液稀釋倍數(shù)不符合要求；洗滌沖擊力太大。浸泡時間太長；
8.顯色劑加量不足或順序顛倒，或混合后加入；
9.底物作用時間不夠；
10.蒸餾水水質(zhì)有問題。
 
解決辦法：
1.實驗前檢查試劑的組分及批號，確認試劑未過期。
2.不要將試劑盒長時間置于常溫下，按使用規(guī)定儲藏。
3.確定所使用的試劑體積正確，加入時間適當。
4.校正移液器，移液器與吸嘴配合要緊密吻合。移液不宜太快，排放應干凈。
5.確認盛酶標的容器不含酶抑制劑如疊氮鈉等，確認配制洗液的容器已洗干凈，確認配制洗液的純化水達到要求且未受污染。
6.孵育溫度應控制在 37-38℃，孵育時間嚴格按照說明書操作。保溫期內(nèi)不宜多開門，以免影響保溫。
7.嚴格按說明書要求稀釋濃縮洗液及洗板，減小洗滌沖擊力，按說明書要求置留洗滌液時間和洗滌次數(shù)。
8.顯色劑滴瓶垂直向下，持力均勻，滴速不宜過快，先加顯色劑 A，后加顯色劑B，不可將A、B液混合后加入
9.準確定時。
10.測定蒸餾水配制試劑對酶免疫法的影響。
 

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